کال‌زایی و باززایی شاخه ارس Juniperus excelsa با استفاده از روش درون‌شیشه‌ای

نوع مقاله : علمی- پژوهشی

نویسنده

مؤسسه تحقیقات جنگلها و مراتع، تهران، ایران

چکیده

جوانه‌زنی و زنده‌مانی کم رویان‌های بذرهای ارس یکی از مهم‌ترین مشکلات جنگل‌کاری این گونه درختی می‌باشد. صرف نظر از مشکلات موجود در روش‌های تکثیر جنسی این گونه، از آنجایی که تاکنون موفقیتی نیز در ریشه‌دار کردن قلمه‌های ارس حاصل نشده، به ریزازدیادی ارس در شرایط in vitro اقدام گردید. به این منظور، از سرشاخه‌های سبز درختان 8-10 ساله ارس (دارای برگ‌های سوزنی) نمونه‌هایی به طول 10 – 15 میلی‌متر جمع‌آوری گردید و پس از سترون‌سازی در 7 نوع محیط کشت (MS و 6 محیط MS که محتوی نیتروژنی آن تغییر داده شده است) حاوی غلظت‌های مختلفی از BAP, Kin, IBA, NAA, 2,4-D کشت گردید. سپس، محیط‌های کشت در یک اتاقک رشد با دمای 25 درجه سانتیگراد (روزانه) و 15 درجه سانتیگراد (شبانه)، 12 ساعت نور 2000 – 2500 لوکس و رطوبت 75 % نگهداری شدند. نتایج نشان می‌دهد که نه‌تنها تیمارهای هورمونی، بلکه تیمارهای ازتی نیز روی کال‌زایی تاثیرات مهمی می‌گذارند، به‌طوری‌که بهترین شرایط برای رشد کالوس، محیط‌های کشت فاقد نیترات پتاسیم و دارای ml/l 100 گلوتامین و نسبت هورمونی بیش از یک BAP/D-4،2 است. به‌علاوه، فصل جمع‌آوری نمونه‌های گیاهی نیز عامل مهمی در محدودیت کال‌زایی است، به‌طوری‌که کال‌زایی در نمونه‌های پاییزی بهتر از نمونه‌های بهاری می‌باشد. در هیچ‌یک از تیمارهای هورمونی در محیط MS شاخه‌زایی صورت نگرفت، ولی تیمارهای غذایی، MS تغییر یافته، باعث تشکیل اندام گردید، به‌طوری‌که با حذف منبع نیترات آمونیوم از محیط MS نه‌تنها رشد جوانه جانبی اولیه بلکه تشکیل جوانه‌های نوپدید به‌صورت مستقیم از پهنک برگ و از کالوس مشاهده شد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Callus induction and plant regeneration of Juniperus excelsa using in vitro technique

نویسنده [English]

  • Parvin Salehi Shanjani
Research institute of Forests and Rangelands, Tehran, Iran
چکیده [English]

Low germination and non-viability of embryos are the main hindrans for forestation of Juniperus excelsa. Conventional methods of asexual plant propagation of this species have not been successful so far. In order to in vitro propagation, small pieces of stem of 8-10 years old trees(10-15 mm long) containing shoot tips with needles fascicles were used as explants. Those were excised from the plants and after surface sterilization. Samples were cultured on a Murashige & Skoog (MS) medium and six revised MS medium supplemented with different concentrations of BAP, Kin, IBA, NAA and 2,4-D. Then the cultures were incubated in a climate chamber at temperatures of 25°C (for day) and 15°C (for night) and 12 hours light at 2000-2500 Lux with 75% humidity. Results indicated that callugenesis and callus growth restricted by both type and nitrate and hormonal source. The best simulation of callus growth occurred on cultures of without KNO3, with gloutamin (100 ml/l) and amount of 2,4-D/BAP at more than 1 ratio. Although adventitious buds were formed on juvenile stages of parent plants, but root induction did not occur. In addition, the season of sampling can also restrict the calogenesis. Such, calougenesis of collected plants in autumn was more than in spring. We could not find any shoot proliferation on medium MS, however by elimination of ammonium nitrate from medium MS bud appeared from callus as well as leaf blade.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Juniperus excelsa
  • Tissue culture
  • hormonal treatment
  • Nitrate Treatment
- صالحی شانجانی، پ.، 1375.
2- صدری، ح.ع.، نراقی، ط.، 1374. مروری بر ریزازدیادی سوزنی‌برگان با تأکید بر تحقیقات تکثیر گونه ارس به‌ویژه کشت جوانه انتهایی. مجله پژوهش و سازندگی، 29: 50-55.
3- Al-Talib, K.H. and Torrey, J.G., 1959. The aseptic culture of isolated buds of Pesudutsuga taxifolla. Plant Physiol., 34: 630-637.
4- Bonga, J.M. 1977. Organogenesis in in vitro cultures of embryonic shoots.
5- Erikson (14bj) of Abies blasama. In vitro, 13: 41-48.
6- Cheah, K.J. and Cheng, T.Y., 1978. Histological analusis of adventitious bud formation in cultured doglas fir cotyledons. Am. J. Bot., 65:72-108.
7- Gomez. M.P. and Segura, J., 1995. Axillary shoot proliferation in cultures of explantas from mature Juniperus oxycedruws trees. Tree physiology. 16(8): 681-686.
8- Gomez. M.P. and Segura, J., 1996. Morphogenesis in leaf and single-cell cultures of mature Juniperus oxycedruws. Tree physiology. 15(9): 625-628.
9- Ilahi, I., 1986. Biotechnology in agriculture and forestry. Vol. 1. In: Tremblay, F.M., Perinet, P., Lalonde, M., Sakai, A., and Bajaj, Y.P.S. (Eds) Trees I. Springer Verlag Publisher, Berlin.: 321-498.
10- Javeed, Q.N.; Perveen, R.; Imtiazul, H.; Ilahi, I., 1980 Propagation of Juniperus polycarpos C. Koch through tissue culture. I. Induction of callus. Pakistan journal of forestry,30(2): 72-77.
11- Konar, R.N. and Oberoi, Y.P. 1965. In vitro development of embryoids on the cotyledons of Bota orientalls. Phytomorphology, 15: 137-140.
12- Moreira-da-Silva, M.H. and Debegh, P., 1996. Clonal and topophysis effect in axillary shoot development on Juniperus brevifolia (Seub.) Antoine. Mededelingen Faculteit landbouwkundige en Toegepaste Biologische Wetenschappen, Universiteit Gent., 61(1): 145-149.
13- Mahmood, A., Khalida, A. and Khan, N.H., 1992. Bud multiplication in Juniper. Hamdard Medicus,35(4): 51-56.
14- Martel, S., Houde, M., Laliberte, S. and Tremblay, M.F., 2001. Studied the effects of nitrogen source on morphogenetic pattern and glutamine synthetase expression in jack pine meristematic nodules and calli in vitro. Symposium on tree Biotechnology in the Next Millenium, USA.
15- Murashige, T. and Skoog, F., 1962. A resived medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Plant Physiol. 14: 10-16.
16- Negussie, A., 1997. In vitro induction of multiple buds in tissue culture of juniperus excelsa. Forest Ecology and Management, 82(2): 115-123.
17- Welinder, K.G., 1994. Plant peroxidase: Structure-function relationship. Plant peroxidase, 1980-1990.